Abstract Background: Endogenous phospholipase A2 inhibitors from snake blood (sbPLIs) have been isolated from several species around the world, with the primary function of self-protection against the action of toxic phospholipases A2. In American snakes, sbPLIs were solely described in pit vipers, in which the natural protection role is justified. In this study, we described a sbPLI in Boa constrictor (popularly known as jiboia), a non-venomous snake species from America. Methods: PLA2 inhibitory activity was tested in the blood plasma of B. constrictor using C. d. terrificus venom as the enzyme source. Antibodies developed against CNF, a sbγPLI from Crotalus durissus terrificus, were used to investigate the presence of homologues in the blood plasma of B. constrictor. A CNF-like molecule with a PLA2 inhibitory activity was purified by column chromatography. The encoding gene for the inhibitor was cloned from B. constrictor liver tissue. The DNA fragment was cloned, purified and sequenced. The deduced primary sequence of interest was aligned with known sbγPLIs from the literature. Results: The blood plasma of B. constrictor displayed PLA2 inhibitory activity. A CNF-like molecule (named BcNF) was identified and purified from the blood plasma of B. constrictor. Basic properties such as molecular mass, composing amino acids, and pI were comparable, but BcNF displayed reduced specific activity in PLA2 inhibition. BcNF showed highest identity scores (ISs) with sbγPLIs from pit vipers from Latin America (90-100%), followed by gamma inhibitors from Asian viperid (80-90%). ISs below 70% were obtained for BcNF and non-venomous species from Asia. Conclusion: A functional sbγPLI (BcNF) was described in the blood plasma of B. constrictor. BcNF displayed higher primary identity with sbγPLIs from Viperidae than to sbγPLIs from non-venomous species from Asia. The physiological role played by sbγPLIs in non-venomous snake species remains to be understood. Further investigation is needed.

Neste trabalho avaliamos o uso da reação em cadeia da polimerase (PCR) na investigação da presença de parasitas Leishmania (Kinetoplastida:Trypanosomatidae) em flebotomíneos individuais. Para isso, foram utilizados três pares flebotomíneo/parasita: Lutzomyia longipalpis/Leishmania chagasi, Lutzomyia migonei/Leishmania amazonensis e Lutzomyia migonei/Leishmania braziliensis, todos eles incriminados na transmissão de leishmaniose cutânea ou visceral. O DNA total a ser amplificado foi extraído de flebotomíneos inteiros, contendo ou não o parasita, sem dissecção prévia do trato digestivo ou combinação de indivíduos. Conteúdos do trato digestivo de flebotomíneos, em especial sangue de camundongo, não interferiram na reação de amplificação. Dez parasitas Leishmania sp. por flebotomíneo foram suficientes para detecção com iniciadores gênero-específicos. Com a utilização de iniciadores para os complexos L. braziliensis e L. mexicana, respectivamente, foi possível discriminar entre L. braziliensis e L. amazonensis, em flebotomíneos infectados experimentalmente (L. migonei).

DNA amplification by the polymerase chain reaction (PCR) was applied in the investigation of the presence of Leishmania (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) parasites in single phlebotomine sandflies. Three phlebotomine/parasite pairs were used: Lutzomyia longipalpis/Leishmania chagasi, Lutzomyia migonei/Leishmania amazonensis and Lutzomyia migonei/Leishmania braziliensis, all of them incriminated in the transmission of visceral or cutaneous leishmaniasis. DNA extraction was performed with whole insects, with no need of previous digestive tract dissection or pooling specimens. The presence of either mouse blood in the digestive tract of the sandflies or the digestive tract itself did not interfere in the PCR. Infection by as few as 10 Leishmania sp. per individual were sufficient for DNA amplification with genus-specific primers. Using primers for L. braziliensis and L. mexicana complexes, respectively, it was possible to discriminate between L. braziliensis and L. amazonensis in experimentally infected vectors (L. migonei).

O flebotomíneo Lutzomyia longipalpis tem sido incriminado como vetor da leishmaniose visceral americana, causada pelo protozoário Leishmania chagasi. Entretanto, tem-se acumulado evidências que sugerem a existência de um complexo e não apenas uma espécie de L. longipalpis na natureza. Nosso trabalho teve como objetivo comparar, ao nível molecular, quatro populações de L. longipalpis de referência, utilizando especimens criados em laboratório, provenientes de regiões geograficamente distintas, através de RAPD-PCR (reação de polimerase em cadeia com amplificação por iniciadores ao acaso). Para isso, o DNA genômico de grupos de flebotomíneos foi amplificado com iniciadores decaméricos únicos com sequência de nucleotídeos arbitrária, na tentativa de se detectar sítios polimórficos. Apenas um dos iniciadores testados foi capaz de distinguir uma das populações (Ilha de Marajó, PA, Brasil) das outras três (Gruta da Lapinha, MG, Brasil; Melgar, Tolima, Colômbia e Libéria, Província de Guanacaste, Costa Rica). Os fragmentos população-específico e os conservados, amplificados por RAPD-PCR, foram clonados e sequenciados, mostrando que a diferença entre eles eles deve-se apenas à uma diferença no número de repetições internas.

The phlebotomine sand fly Lutzomyia longipalpis has been incriminated as a vector of American visceral leishmaniasis, caused by Leishmania chagasi. However, some evidence has been accumulated suggesting that it may exist in nature not as a single but as a species complex. Our goal was to compare four laboratory reference populations of L. longipalpis from distinct geographic regions at the molecular level by RAPD-PCR. We screened genomic DNA for polymorphic sites by PCR amplification with decamer single primers of arbitrary nucleotide sequences. One primer distinguished one population (Marajó Island, Pará State, Brazil) from the other three (Lapinha Cave, Minas Gerais State, Brazil; Melgar, Tolima Department, Colombia and Liberia, Guanacaste Province, Costa Rica). The population-specific and the conserved RAPD-PCR amplified fragments were cloned and shown to differ only in number of internal repeats.

A mionecrose é um dos efeitos causados pelo veneno de Bothrops jararacussu. Uma miotoxina com homologia estrutural à fosfolipase A2 (PLA2), mas sem atividade enzimática, foi isolada desse veneno. O veneno de Crotalus durissus terrificus apresenta também atividade miotóxica, que vem sendo atribuída à crotoxina e à PLA2 (crotoxina B), o componente básico do complexo crotoxina. O veneno de Bothrops jararacussu apresenta três proteínas, que têm identidade imunológica com a PLA2 da crotoxina. O presente trabalho comparou a eficiência dos antivenenos polivalentes comerciais produzidos pelo Instituto Butantan - o antiveneno botrópico (AB) e o antiveneno botrópico-crotálico (AB/C) - na neutralização das atividades letal, hemorrágica, coagulante e miotóxica do veneno de B. jararacussu. Os dois antivenenos neutralizaram de maneira semelhante a atividade hemorrágica, mas o AB/C foi três vezes mais potente que o AB em neutralizar a ação miotóxica e duas vezes mais potente na neutralização da letalidade e na ação coagulante do veneno de B. jararacussu. Os dados sugerem que a utilização do AB/C pode ser vantajosa no tratamento de pacientes picados por serpentes dessa espécie

Myonecrosis is one of the effects of Bothrops jararacussu venom, from which a myotoxin was isolated showing structural homology to phospholipase A2 (PLA2), but without enzimatic activity. Such myotoxic activity is also present in the Crotalus durissus terrificus venom, and is atributed to crotoxin and to PLA2 (crotoxin B), the basic component of the crotoxin complex. The Bothrops jararacussu venom showed three proteins with immunologic identity to PLA2 from crotoxin. The bothropic (AB) and the bothropic/crotalic (AB/C) antivenoms, two commercial polyvalent antivenoms produced at Instituto Butantan, were compared in order to assess their capacity for neutralization of the lethal, hemorrhagic, coagulant and myotoxic activities of Bothrops jararacussu venom. Both antivenoms showed the same level of hemorrhagic activity neutralization. However, AB/C was about three times more efficient than AB in neutralizing the myotoxic activity, and two times more potent for neutralization of lethality and coagulant activity of Bothrops jararacussu venom. These data suggest that the use of AB/C could be of value in the treatment of patients bitten by snakes of this species